จะทราบความเข้มข้นที่เหมาะสมได้อย่างไร?
สำหรับตัวเหนี่ยวนำ IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside) ยิ่งความเข้มข้นสูงเท่าไรก็ยิ่งดีเท่านั้นความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดขึ้นอยู่กับเงื่อนไขการทดลองเฉพาะและผลการเหนี่ยวนำที่ต้องการ
โดยทั่วไปความเข้มข้นของ IPTG จะใช้ในช่วง 0.1-1 mMความเข้มข้นที่ต่ำกว่าสามารถลดผลเสียต่อการเจริญเติบโตของเซลล์ และอาจลดความเป็นพิษต่อเซลล์เนื่องจากการแสดงออกมากเกินไปของโปรตีนเป้าหมายความเข้มข้นที่สูงขึ้นอาจทำให้เกิดภาระในการเผาผลาญของเซลล์มากเกินไป ซึ่งส่งผลต่อการเติบโตของเซลล์และประสิทธิภาพการแสดงออก
วิธีระบุความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดคือการประเมินระดับการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายโดยทำการทดสอบการเหนี่ยวนำ IPTG ที่ความเข้มข้นต่างกันการทดสอบการเพาะเลี้ยงขนาดเล็กสามารถทำได้โดยใช้ช่วงความเข้มข้นของ IPTG (เช่น 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM เป็นต้น) และผลการแสดงออกที่ความเข้มข้นต่างกันสามารถประเมินได้โดยการตรวจจับระดับการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมาย (เช่น Western การตรวจจับรอยเปื้อนหรือเรืองแสง)จากผลการทดลอง ความเข้มข้นที่มีผลการแสดงออกที่ดีที่สุดถูกเลือกให้เป็นความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุด
นอกจากนี้ คุณยังสามารถอ้างอิงเอกสารที่เกี่ยวข้องหรือประสบการณ์ของห้องปฏิบัติการอื่นๆ เพื่อทำความเข้าใจช่วงความเข้มข้นของ IPTG ที่ใช้กันทั่วไปภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่คล้ายคลึงกัน จากนั้นจึงปรับให้เหมาะสมและปรับเปลี่ยนตามความต้องการในการทดลอง
เป็นสิ่งสำคัญที่ต้องสังเกตว่าความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับระบบการแสดงออก โปรตีนเป้าหมาย และสภาวะการทดลองที่แตกต่างกัน ดังนั้นจึงเป็นการดีที่สุดที่จะปรับให้เหมาะสมเป็นกรณีๆ ไป
เวลาโพสต์: Sep-28-2023