4-ไนโตรฟีนิล เบตา-ดี-กาแลคโตไพราโนไซด์ CAS:200422-18-0

สรรพคุณ: ONPG เป็นสารตั้งต้นที่ใช้เฉพาะในการตรวจจับการมีอยู่และกิจกรรมของเอนไซม์ β-galactosidase เมื่อเอนไซม์ β-galactosidase มีอยู่และทำงานอยู่ มันจะสลาย ONPG ออกเป็นสองผลิตภัณฑ์ ได้แก่ o-nitrophenol และอนุพันธ์ของกาแลคโตส การปลดปล่อย o-nitrophenol ส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนสีเป็นสีเหลือง ซึ่งสามารถวัดได้โดยใช้เครื่องสเปกโทรโฟโตมิเตอร์

การประยุกต์ใช้: ONPG มีการประยุกต์ใช้หลายด้านในการวิจัยด้านชีววิทยาโมเลกุลและชีวเคมี:

การหาค่ากิจกรรมของเอนไซม์ β-galactosidase: ONPG มักใช้ในการวัดและหาปริมาณกิจกรรมของเอนไซม์ β-galactosidase อัตราการเกิด o-nitrophenol ซึ่งแปรผันตรงกับกิจกรรมของเอนไซม์ สามารถวัดได้ด้วยวิธีสเปกโทรโฟโตเมตรี

การแสดงออกและการควบคุมยีน: ONPG มักถูกนำมาใช้ในการทดลองที่เกี่ยวข้องกับการศึกษาการแสดงออกและการควบคุมยีน โดยมักใช้ในการทดสอบโปรตีนลูกผสม เช่น ระบบลูกผสม lacZ ที่ใช้กันทั่วไป เพื่อศึกษาการแสดงออกของยีนภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์เฉพาะ กิจกรรมของเบต้า-กาแลคโตซิเดสที่วัดได้โดยใช้ ONPG ให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับระดับการแสดงออกของยีน

การตรวจคัดกรองกิจกรรมของเอนไซม์ β-galactosidase: ONPG สามารถใช้เป็นวิธีการตรวจคัดกรองแบบวัดสีในเทคโนโลยีดีเอ็นเอลูกผสมเพื่อระบุการมีอยู่และการทำงานของยีน LacZ ซึ่งเป็นยีนที่เข้ารหัสเอนไซม์ β-galactosidase วิธีการตรวจคัดกรองนี้ช่วยในการระบุโคลนที่มียีนที่สนใจอยู่

การศึกษาจลนศาสตร์ของเอนไซม์: ONPG ยังมีประโยชน์ในการศึกษาจลนศาสตร์ของเอนไซม์ β-galactosidase ด้วยการวัดอัตราการเกิดปฏิกิริยาระหว่างเอนไซม์กับสารตั้งต้นที่ความเข้มข้นของสารตั้งต้นที่แตกต่างกัน ทำให้สามารถกำหนดพารามิเตอร์ทางจลนศาสตร์ เช่น ค่าคงที่ Michaelis-Menten (Km) และอัตราการเกิดปฏิกิริยาสูงสุด (Vmax) ได้